miR-497-5p在前成骨细胞MC3T3-E1分化和矿化中的作用及机制探讨

作者：胡熹; 罗俊^*

来源：上海口腔医学, 2023, 32(01): 17-22.

DOI：10.19439/j.sjos.2023.01.004

• 前成骨细胞
• 微小RNA-497-5p
• 分化
• 矿化

目的：研究微小RNA(miR)-497-5p在前成骨细胞MC3T3-E1分化和矿化中的作用，并探讨其相关机制。方法：取第3代MC3T3-E1细胞，分别转染miR-497-5p过表达质粒miR-497-5p mimics、低表达质粒miR-497-5p inhibitor和阴性对照质粒miR-497-5p NC，设为miR-497-5p mimics组、miR-497-5p inhibitor组和miR-497-5p NC组。取不做处理的细胞作为空白组。成骨诱导后14天，检测碱性磷酸酶（ALP）活性；免疫印迹法检测成骨分化相关蛋白骨钙素（OCN）、I型胶原（COL-I）蛋白表达量；茜素红染色法观察矿化情况；免疫印迹法检测Smad泛素化调节因子2(Smurf2)蛋白表达量；双荧光素酶实验验证miR-497-5p与Smurf2的靶向关系。采用SPSS 25.0软件包进行统计学分析。结果：与空白组、miR-497-5p NC组相比，miR-497-5p mimics组ALP活性显著增强，OCN、COL-I蛋白表达量及矿化结节面积构成比显著升高，Smurf2蛋白表达量显著降低（P<0.05）;miR-497-5p inhibitor组ALP活性显著减弱，OCN、COL-I蛋白表达量及矿化结节面积构成比显著降低，Smurf2蛋白表达量显著升高（P<0.05）；与Smurf2 3’-UTR-WT+miR-497-5p NC组、Smurf2 3’-UTR-MT+miR-497-5p mimics组和Smurf2 3’-UTR-MT+miR-497-5p NC组相比，Smurf2 3’-UTR-WT+miR-497-5p mimics组双荧光素酶活性值显著降低（P<0.05）。结论：过表达miR-497-5p对前成骨细胞MC3T3-E1的分化和矿化具有促进作用，其作用机制可能与负性靶向调控Smurf2蛋白表达有关。

• 单位
  南昌大学第二附属医院; 江西省口腔生物医学重点实验室; 南昌大学附属口腔医院