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摘要
目的 采用核糖核酸酶H依赖性PCR(rhPCR)扩增结合熔解曲线分析对石菖蒲与藏菖蒲进行快速鉴定及相互掺杂检测。方法 比对分析石菖蒲与藏菖蒲核基因组内转录间隔区2(ITS2)序列，寻找稳定的单核苷酸多态性(SNP)位点设计特异性扩增引物，根据扩增产物熔解温度(Tm)不同进行鉴别，考察引物特异性，筛选最佳混合引物比例，并考察该方法灵敏度、掺混检出限及适用性。结果 设计的特异性引物具有良好特异性，石菖蒲、藏菖蒲扩增产物可分别产生(89.4±0.2)与(87.9±0.2)℃的单一特异性熔解曲线峰。所建立的方法灵敏度高，DNA检出限均为0.1 ng,对石菖蒲和藏菖蒲的掺混检出限均为10%。检测样品28份，其中石菖蒲16份、藏菖蒲12份，检测结果与DNA条形码结果一致。结论 该研究基于RNase H依赖性PCR扩增结合熔解曲线建立的石菖蒲及藏菖蒲鉴别及掺杂检测方法可有效鉴别石菖蒲、藏菖蒲及掺杂样品，有利于石菖蒲药材质量控制。
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