ERK基因过表达对肺癌A549细胞增殖、迁移和侵袭的影响

作者：杨婷婷; 王雅蓉; 战仕胜; 贾琴琴; 王秀青^*

来源：宁夏医科大学学报, 2020, 42(04): 332-339.

DOI：10.16050/j.cnki.issn1674-6309.2020.04.002

• 肺癌A549细胞
• 细胞外信号调节激酶
• 增殖
• 迁移
• 侵袭

目的通过构建细胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated kinase,ERK)过表达载体并进一步转染至肺癌A549细胞筛选得到稳定转染的细胞株并验证其过表达效果,以及测定过表达ERK后对肺癌A549细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法从人肺腺癌A549细胞中提取RNA,逆转录PCR(RT-PCR)扩增出ERK目的片段CDS区,构建重组过表达载体pCDH-CMV-MCS-EF1α-GreenPuro-ERK,进行双酶切及测序验证。将人肺癌细胞A549分为重组ERK组和空载体组,采用脂质体转染法分别转染293T细胞进行慢病毒包装获得高滴度的慢病毒颗粒。并进一步转染至肺癌细胞A549,利用嘌呤霉素筛选稳定过表达的A549细胞。采用Real-time PCR法和Western blot实验检测稳定过表达后ERK mRNA和蛋白表达水平。利用CCK-8实验、划痕实验、transwell实验对比过表达后肺癌细胞A549增殖、迁移、侵袭情况,采用Western blot法检测并对比过表达后ERK/JNK通路蛋白表达变化。结果经双酶切分析及测序验证,成功构建了ERK过表达稳转细胞株,且过表达后肺癌A549细胞增殖、侵袭能力增加(P均<0.05)。过表达ERK后,p-90RSK、C-JUN、CMYC、P-JNK、JNK蛋白水平上调(P均<0.05)。结论 ERK过表达可增强人肺癌细胞A549的增殖、迁移、侵袭能力。

• 单位
  宁夏医科大学