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摘要
为了更加快捷地筛选大丽轮枝菌致病关键基因，利用聚乙二醇介导的原生质体转化法构建病原菌随机插入突变体库，对部分阳性转化子的生长表型指标和致病力进行分析，筛选生长发育与致病缺陷突变体并进行靶标基因定位。结果表明，本研究共获得13 030多个阳性转化子，随机挑选5个转化子与V991野生型菌株进行比较分析，发现其中一个突变体在PDA和不同碳源培养基上的菌落直径、产孢量以及致病力均显著降低。侧翼序列测序结果结合Blast比对分析表明，该缺陷突变体中的潮霉素抗性基因表达盒定位于大丽轮枝菌3号染色体1 528 782 bp处，属于内切葡聚糖酶1基因（VDAG＿04017）。综上所述，本研究通过大丽轮枝菌插入突变体库构建、突变体生长表型指标和致病力鉴定及靶标基因定位等一系列分子生物学手段，可初步鉴定病原菌致病相关基因，为从全基因组层面深入研究大丽轮枝菌致病机制奠定了一定基础。
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