苦豆子总碱及其两种单体生物碱对PC12细胞活性的抑制作用

作者：高莉; 罗福祥; 阿娜古丽·马合木提; 罗静莺; 闫明^*

来源：中国实验方剂学杂志, 2023, 29(17): 126-133.

DOI：10.13422/j.cnki.syfjx.20230703

• 苦豆子生物碱
• PC12细胞
• 抑制率
• 乳酸脱氢酶(LDH)漏出率
• 细胞凋亡
• 细胞周期

目的：研究比较从苦豆子中提取分离的苦豆子总碱、苦参碱、槐定碱分别对肾上腺嗜铬细胞瘤细胞（PC12细胞活性的影响。方法：采用噻唑蓝（MTT）比色法检测2、1、0.5、0.25、0.125、0.062 5 g·L-1苦豆子总碱、苦参碱、槐定碱分别对PC12细胞增殖的影响；酶标法检测细胞乳酸脱氢酶（LDH）渗漏率；流式细胞术检测细胞凋亡率、细胞周期、细胞内Ca2+水平；实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白（Bax）mRNA转录水平；蛋白免疫印迹法（Western blot）检测细胞凋亡相关蛋白胱天蛋白酶-3(Caspase-3)、胱天蛋白酶-8(Caspase-8)及Bcl-2、Bax蛋白的表达。结果：与空白组比较，苦豆子总碱、苦参碱、槐定碱均能抑制PC12细胞增殖，使细胞LDH渗漏率显著增加，细胞内Ca2+荧光强度显著增强，诱导细胞的凋亡，并呈现一定的浓度依赖性（P<0.05,P<0.01），其中苦豆子总碱对PC12细胞的增殖抑制作用和诱导细胞凋亡作用最强（P<0.01）；经苦豆子总碱、苦参碱、槐定碱处理后，苦豆子总碱组细胞周期进程G1/G0被阻滞，苦参碱、槐定碱组细胞周期进程G1/S被阻滞；PC12细胞Bax mRNA表达量均明显升高（P<0.05,P<0.01）,Bcl-2 mRNA表达量均明显降低（P<0.05,P<0.01）；均能明显下调细胞抗凋亡蛋白Bcl-2的表达（P<0.05,P<0.01），明显上调促凋亡蛋白Bax、Caspase-3、Caspase-8的表达（P<0.05,P<0.01），其中苦豆子总碱组蛋白表达变化最为显著。结论：苦豆子总碱、苦参碱、槐定碱中，苦豆子总碱对PC12细胞活性的抑制作用最强，其作用机制可能与其抑制抗凋亡蛋白表达，上调促凋亡蛋白表达，激活细胞线粒体Caspase-8凋亡通路有关。

• 单位
  新疆维吾尔自治区维吾尔医药研究所