摘要
目的利用RNAi、RT-PCR和Western blot技术,探讨靶向存活素的基因沉默联合X射线照射对肺腺癌移植瘤的抑制作用及相关机制。方法根据Genbank中存活素(Survivin)的cDNA序列设计RNAi序列,构建shRNA真核表达载体pGenesil-2-Survivin,经过酶切,测序鉴定后,将经脂质体包裹的pGenesil-2-Survivin注射到裸鼠移植肺腺癌瘤体内,并联合5 Gy X射线照射,利用RT-PCR和Western blot技术检测移植肿瘤内Survivin mRNA和蛋白表达情况,观察肿瘤生长变化。实验分为正常组、pGenesil-2-Survivin组、5 Gy照射组和pGenesil2-Survivin 5 Gy组。结果RT-PCR和Western blot结果显示,5 Gy X射线没有明显改变Survivin mRNA和蛋白的表达,而pGenesil-2-Survivin和pGenesil-2-Sur-vivin 5 Gy照射则明显抑制了Survivin的表达,与正常组比较具有统计学意义(P<0.001);5 Gy照射后,肿瘤的生长被抑制,而pGenesil-2-Survivin质粒的抑制作用更强,5 Gy照射能增强pGenesil-2-Survivin质粒的抑制作用。结论靶向存活素的RNAi能够明显抑制裸鼠移植肿瘤的生长,联合5 Gy X射线照射能够增强抑制作用,这可能与Survivin基因mR-NA与蛋白被抑制相关。
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单位公共卫生学院; 吉林大学; 吉林大学中日联谊医院