摘要
目的 探讨自噬是否参与调节亚砷酸钠诱导的人脐静脉血管内皮细胞功能失调。方法 分离培养人原代脐静脉内皮细胞,不同剂量亚砷酸钠处理24 h,分别为0(对照)、2、5、10、20、30、50 μmol/L,CCK8法检测细胞活力。根据细胞活力结果确定后续实验染砷剂量,流式细胞术检测细胞内一氧化氮(NO)含量(亚砷酸钠处理4 h),蛋白免疫印迹法(Western blot)检测自噬标志蛋白LC3表达(亚砷酸钠处理0、6、12、24 h),电镜检测自噬体(亚砷酸钠处理12 h)。同时,以0.1 mmol/L 3-MA(自噬抑制剂)预处理人原代脐静脉内皮细胞2 h,然后30 μmol/L亚砷酸钠诱导,与单独30 μmol/L亚砷酸钠组比较上述检测指标。结果 成功分离培养人原代脐静脉内皮细胞。与对照组[细胞活力:(99.97 ± 5.33)%,NO含量:42 048.34 ± 789.61]比较,30 μmol/L亚砷酸钠组细胞活力[(73.00 ± 0.86)%]显著下降,细胞内NO含量(23 353.97 ± 971.85)显著降低,差异有统计学意义(P均< 0.01)。30 μmol/L亚砷酸钠分别处理6、12和24 h,LC3Ⅱ表达水平(5.782 ± 2.789、9.692 ± 2.222、5.573 ± 2.941)明显高于处理0 h(1.000 ± 0.383,P均< 0.05),其中12 h时LC3Ⅱ表达水平最高。30 μmol/L亚砷酸钠处理12 h,电镜下观察细胞内自噬体明显多于对照组。与单独30 μmol/L亚砷酸钠组[细胞活力:(68.78 ± 1.55)%;LC3Ⅱ表达水平:5.680 ± 0.545;NO含量:13 025.78 ± 962.61]比较,3-MA预处理组细胞活力[(79.54 ± 4.99)%]升高,LC3Ⅱ表达水平(3.956 ± 0.398)下降,差异有统计学意义(P均< 0.05);细胞内NO含量(13 988.51 ± 1 671.07)差异无统计学意义(P > 0.05)。结论 自噬参与砷诱导的人脐静脉血管内皮细胞功能失调。
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单位中心实验室; 哈尔滨医科大学; 中国疾病预防控制中心