禽流感病毒H5N1亚型HA蛋白在昆虫细胞中的表达、纯化及反应原性分析

作者：仝晓丹; 王玉娟; 杨仕标; 盛东北; 赵文华; 黄晓静; 谭菲菲; 王同燕^*; 田克恭^*

来源：黑龙江畜牧兽医, 2021, (10): 72-76.

DOI：10.13881/j.cnki.hljxmsy.2020.06.0384

• 禽流感病毒
• 血凝素蛋白
• 杆状病毒表达系统
• 蛋白纯化
• 免疫印迹分析
• 反应原性分析
• Sf 9细胞

为了获得可溶性的禽流感病毒H5N1亚型HA蛋白,并将其用于单克隆抗体的制备和筛选,试验利用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统进行HA蛋白的表达和纯化,以含全长HA基因的重组质粒为模板,经PCR扩增得到HA片段并克隆至pFastBac1载体,将鉴定正确的供体质粒转化至DH10Bac感受态细胞,获得Bacmid重组质粒,转染Sf 9细胞后获得重组杆状病毒。通过Western-blot和间接ELISA验证HA蛋白的表达情况和反应原性。结果表明:成功获得含有禽流感病毒H5N1亚型HA基因重组杆状病毒,HA蛋白可以分泌表达,大小约为63 ku,与预期大小一致,且能与H5N1标准阳性血清发生特异性反应;纯化的HA蛋白与免疫小鼠血清反应性良好。说明本研究成功表达并纯化获得了禽流感病毒H5N1亚型HA蛋白,并且具有良好的反应原性。

• 单位
  普莱柯生物工程股份有限公司; 云南省畜牧兽医科学院