人脐带间充质干细胞外泌体miR-100对多囊卵巢综合征患者颗粒细胞炎症的影响

作者：赵元元; 路军涛; 吴小华^*

来源：山东大学学报(医学版), 2023, 61(05): 51-58.

• 多囊卵巢综合征
• 人脐带间充质干细胞
• 外泌体
• 微小RNAs
• 颗粒细胞
• 炎症

目的 探究人脐带间充质干细胞(hUC-MSCs)来源的外泌体miR-100对多囊卵巢综合征(PCOS)患者颗粒细胞炎症的影响。方法 选取2021年3月至2021年12月于石家庄市第四医院生殖医学中心就诊的70例PCOS患者为研究对象(PCOS组),同期70例因输卵管因素助孕治疗的非PCOS患者为对照(对照组),比较两组患者的临床基线资料及IVF妊娠结局相关参数。采用实时荧光定量PCR (RT-qPCR)检测患者颗粒细胞肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、干扰素-γ(IFN-γ)的表达。采用二元Logistic回归分析影响PCOS的危险因素。RT-qPCR验证hUC-MSCs外泌体中miR-100的表达水平。合成miR-100模拟物及其对照转染至人卵巢颗粒细胞KGN中，RT-qPCR检测miR-100的表达水平。在脂多糖(LPS)诱导的KGN炎症细胞模型中转染miR-100模拟物及其对照，RT-qPCR检测TNF-α、IFN-γ的mRNA表达水平。采用双荧光素酶报告基因系统检测miR-100对靶基因的调控作用。miR-100过表达后，Western blotting检测KGN炎症模型中Toll样受体4(TLR4)、 p-IκBa、IκBa、p-p65、 p65蛋白水平。结果 与对照组比较，PCOS组患者体质量指数(BMI)、黄体生成素(LH)、雌二醇(E2)、睾酮(T)、胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)、窦卵泡数(AFC)、获卵数升高(P值分别为<0.001、<0.001、0.020、<0.001、<0.001、<0.001、<0.001);但MII卵率和2PN受精率降低，差异有统计学意义(P均<0.001)。与对照组患者比较，PCOS组患者TNF-α、IFN-γ的mRNA水平升高，差异有统计学意义(P均<0.001)。二元Logistic回归分析结果显示，LH、HOMA-IR、TNF-α、IFN-γ是影响PCOS的危险因素(P值分别为0.031、0.001、0.030、0.005)。RT-qPCR结果显示，miR-100在hUC-MSCs-exos中富集，miR-100过表达可抑制LPS诱导的颗粒细胞炎症因子TNF-α、IFN-γ的mRNA表达水平(P值分别为0.041、<0.001)。双荧光素酶报告基因结果显示，miR-100能结合TLR4 mRNA 3’UTR并有效抑制其表达(P<0.001)。Western blotting结果显示，与miR-NC组比较，过表达miR-100后KGN炎症模型中TLR4、 p-IκBa和p-p65蛋白表达降低(P值分别为<0.001、<0.001、0.049),IκBa蛋白水平升高(P<0.001)。结论 PCOS患者颗粒细胞TNF-α、IFN-γ表达升高，是影响PCOS的危险因素。hUC-MSCs来源的外泌体miR-100可通过靶向TLR4/NF-κB信号通路抑制PCOS颗粒细胞的炎症反应。

• 单位
  河北医科大学; 石家庄市第四医院; 河北医科大学第四医院