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摘要
目的探讨大蒜素对铅中毒大鼠海马细胞凋亡损伤的抑制作用。方法 60只雄性3周龄SD大鼠按随机数字表法分成6组,每组10只,分别为低剂量(A-L)、中剂量(A-M)和高剂量(A-H)大蒜素组,铅暴露(Pb)组,二巯基丁二酸(DMSA)组和空白对照组。空白对照组提供超纯水,其余5组饮用1.0 g/L的醋酸铅水溶液,20 d后换为超纯水并进行灌胃给药,A-L组、A-M组和A-H组大蒜素用药剂量分别为2.7 mg/kg、5.4 mg/kg、10.8 mg/kg,DMSA剂量为10.8 mg/kg,Pb组予9g/L盐水。模型建立后处死大鼠收集全血和海马组织。检测血铅和海马组织铅浓度,采用TUNEL染色法检测海马组织细胞凋亡水平,实时荧光定量PCR(qPCR)和Western blot法检测天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3 (caspase-3)、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-9(caspase-9)和聚腺苷酸二磷酸核糖转移酶(PARP)的mRNA和激活型蛋白表达量,采用免疫荧光技术检测细胞色素C在胞质内的表达情况。结果 1.A-L组、A-M组和A-H组大鼠血铅和海马组织铅水平[(190.54±11.33)μg/L,(0.28±0.03)μg/L;(159. 55±16. 94)μg/L,(0. 22±0. 06)μg/L;(116. 62±8. 85)μg/L,(0.19±0.01)μg/L]显著低于Pb组[(271.34±21.23)μg/L,(0.31±0.04)μg/L],差异均有统计学意义(均P<0.05);DMSA组大鼠血铅和海马组织铅水平[(50.12±7.44)μg/L,(0.15±0.03)μg/L]低于A-L组、A-M组和A-H组。2. TUNEL染色结果显示,A-L组、A-M组和A-H组大鼠海马细胞凋亡水平显著低于Pb组[(2.81±0.17)%,(2.08±0.28)%,(1.33±0.08)%比(4. 23±0.17)%],差异均有统计学意义(均P<0.05);DMSA组大鼠海马细胞凋亡水平[(2. 63±0. 32)%]高于A-M组和A-H组,低于Pb组。3. qPCR结果表明,与Pb组比较,A-H组caspase-3、caspase-9和PARP的mRNA均显著下调(1.07±0. 05,1.02±0. 02,1. 11±0. 02比1.34±0.02,1.26±0.05,1.93±0. 07),差异均有统计学意义(均P <0. 05); A-L组、A-M组caspase-3和PARP mRNA表达量下调(1.21±0.05,1..43±0. 12、1. 16±0.02,1.20±0.06比1.34±0.02,1.93±0.07),差异均有统计学意义(均P <0. 05),caspase-9 mRNA无明显变化;A-H组caspase-3、caspase-9和PARP的mRNA水平(1.07±0.05,1.02±0.02,1.11±0.02)均低于DMSA组(1. 14±0.02,1.15±0.08,1.32±0.05)。4.Western blot结果 :与Pb组比较,A-H组激活型caspase-3、caspase-9和PARP蛋白表达量显著下调(A-H组:0.44±0.15、0.58±0.25、0.31±0.19和0.23±0.07比Pb组:0.69±0. 13、0.72±0.22、0.55±0.21和0.43±0. 10),A-M组激活型caspase-9蛋白表达量低于Pb组(A-M组:0. 59±0. 18比Pb组:0.72±0. 22),差异均有统计学意义(均P<0.05); A-H组激活型caspase-3和RARP蛋白表达低于DMSA组。5.荧光染色结果显示A-L组、A-M组和A-H组细胞色素C在胞质中的表达量均显著低于Pb组及DMSA组。结论大蒜素在降低SD大鼠海马组织铅的同时,可通过线粒体通路抑制铅中毒大鼠海马组织细胞凋亡,大蒜素抑制凋亡损伤的作用可能优干DMSA。
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单位上海交通大学医学院附属新华医院; 华东理工大学
