Caspase-8在干细胞移植减轻心肺复苏后大鼠脑皮质细胞凋亡中的作用

作者：卢恩明; 卓琪; 陈法禄; 林庆明^*; 王晓萍

来源：中华危重病急救医学, 2022, 34(12).

• 心搏骤停
• 心肺复苏
• 凋亡
• 脑损伤
• 干细胞

目的探讨骨髓间充质干细胞(BMMSC)移植对心搏骤停/心肺复苏(CA/CPR)后大鼠脑皮质细胞凋亡的影响及可能的作用机制。方法 2只4～5周龄SD大鼠制备BMMSC, 传代至第3代用于实验。将18只SD大鼠按随机数字表法分为假手术组、模型组(CA/CPR组)和干预组(BMMSC组), 每组6只。采用窒息法诱导大鼠CA, 6 min后进行CPR;假手术组除一般手术操作外不诱导CA。于自主循环恢复(ROSC)后1 h, CA/CPR组通过尾静脉注射0.5 mL磷酸盐缓冲液(PBS);BMMSC组通过尾静脉注射2×109/L绿色荧光蛋白(GFP)标记的BMMSC。CPR后72 h评估各组大鼠神经功能缺损评分(NDS);采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清S100钙结合蛋白B(S100B)水平;在荧光显微镜下观察BMMSC在脑组织中的分布;采用原位末端缺刻标记试验(TUNEL)检测脑皮质细胞凋亡率;采用蛋白质免疫印迹试验(Western blotting)检测脑皮质活化天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶(caspase-8和caspase-9)的蛋白表达。结果 CPR后3 d, 与假手术组比较, CA/CPR组大鼠脑皮质细胞凋亡增加, 脑损伤明显, NDS评分明显下降(分:56.6±5.5比80.0±0.0, P<0.05), 血清S100B蛋白水平明显升高(ng/L:45.1±4.7比19.1±1.4, P<0.05), 脑皮质细胞凋亡率明显增加〔(52.9±11.8)%比(10.1±1.5)%, P<0.05〕, 脑皮质活化caspase-8蛋白表达明显升高(caspase-8/GAPDH:0.689±0.047比0.330±0.108, P<0.05), 活化caspase-9蛋白表达差异无统计学意义(caspase-9/GAPDH:0.428±0.014比0.426±0.021, P>0.05)。GFP标记的BMMSC移植后主要分布在脑皮质, 与CA/CPR组比较, BMMSC组大鼠脑皮质细胞凋亡和脑损伤均明显改善;NDS评分明显升高(分:70.6±2.1比56.6±5.5, P<0.05), 血清S100B蛋白水平明显下降(ng/L:32.0±3.2比45.1±4.7, P<0.05), 脑皮质细胞凋亡率明显减少〔(31.1±3.4)%比(52.9±11.8)%, P<0.05〕, 活化caspase-8蛋白表达明显下降(caspase-8/GAPDH:0.427±0.067比0.689±0.047, P<0.05), 活化caspase-9蛋白表达差异无统计学意义(caspase-9/GAPDH:0.431±0.022比0.428±0.014, P>0.05)。结论 BMMSC移植可能通过死亡受体介导凋亡通路抑制脑细胞凋亡, 减轻CA/CPR后大鼠脑损伤。

• 单位
  福建医科大学