无标签人源性脂联素球状结构的表达、纯化与活性检测

作者：张立剑; 孙璐; 李冬冬; 郭云萍; 王增禄; 刘毅; 张英起; 陶凌

来源：生物技术通讯, 2013, (02): 169-172.

• 重组人脂联素球状结构
• 表达纯化
• 活性检测 human globular domain of adiponectin
• expression and purification
• biological activity

目的:利用基因工程方法构建无标签人源性脂联素球状结构(gAd)基因的原核表达载体,并对重组蛋白进行诱导表达、纯化及鉴定。方法:从正常人脂肪组织里提取总RNA,反转录合成cDNA,经PCR扩增、酶切后连入pET-22b(+)载体构建重组质粒pET-22b(+)-gAd,转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,经低温、低浓度IPTG诱导使其可溶性表达,采用硫酸铵沉淀、凝胶过滤层析和阴离子交换层析三步分离纯化,得到不带任何标签的人源性gAd;运用SDS-PAGE、Western印迹、HPLC对重组蛋白进行鉴定,通过对AMP激活的蛋白激酶(AMPK)的磷酸化水平检测纯化蛋白的生物学活性。结果:构建了...

• 单位
  第四军医大学; 西京医院