史氏鲟(Acipenser schrenckii)两种促性腺激素β亚基的原核表达

作者：胡红霞; 贝锦新; 刘晓春; 张勇; 林浩然

来源：中山大学学报(自然科学版), 2008, (02): 89-92.

DOI：10.3321/j.issn:0529-6579.2008.02.021

• 史氏鲟(Acipenserschrenckii)
• 促性腺激素
• β -亚基
• 蛋白质
• 遗传工程 Acipenser schrenckii
• gonadotropin
• β -subunit
• proteins
• genetic engineering

采用遗传工程方法,重组表达史氏鲟两种促性腺激素β亚基蛋白。选用原核表达载体pET-22b(+),分别插入史氏鲟GtHⅠ&Ⅱβ亚基成熟肽cDNA序列,构建成C端含有6个组氨酸(6-His)融合蛋白标签的表达质粒;分别转化大肠杆菌表达菌株BL21(DE3)并诱导表达2个基因。SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳显示重组融合蛋白相对分子质量分别为:GtHⅠβ亚基大约14 000,GtHⅡβ亚基15 000左右。分别用抗6个组氨酸融合标签的单克隆抗体及兔抗鲟鱼GTH多克隆抗体对2个表达蛋白进行Western-Blot分析,结果显示重组蛋白表达正确且有较高的免疫活性。GTHⅠβ重组蛋白在2 h就有明显的表达,6 h后随着时间增加表达量不再增加;25℃诱导重组蛋白产量比37℃诱导产量低。获得的重组蛋白质将可用于建立鲟鱼GtH的放射免疫测定方法。

• 单位
  中山大学; 国家淡水渔业工程技术研究中心; 北京市水产科学研究所