Hcy及叶酸、EGCG对HUVECs TM启动子甲基化状态的调节作用

作者：王丽珍; 周雪颖; 韩沙如拉; 袁瑞; 杨志甫^*

来源：中国神经精神疾病杂志, 2022, 48(07): 398-404.

DOI：10.3969/j.issn.1002-0152.2022.07.003

• DNA甲基化
• 血栓调节蛋白
• 同型半胱氨酸
• 人脐静脉内皮细胞
• 表没食子儿茶素-3-没食子酸酯
• 叶酸

目的探讨同型半胱氨酸（homocysteine,Hcy）对脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cells,HUVECs）血栓调节蛋白（thrombomodulin,TM）启动子区甲基化水平的影响及其机制，明确叶酸（folic acid,FA）与表没食子儿茶素-3-没食子酸酯（epigallocatechin-3-gallate,EGCG）对Hcy所引起的上述变化的干预作用及机制。方法 体外培养HUVECs细胞株，分为对照组、不同浓度（50、100、200、500、1000μmol/L）Hcy组、100μmol/L Hcy+FA组以及100μmol/L Hcy+EGCG组。干预24 h后，采用流式细胞学技术检测各组HUVECs凋亡率；巢氏甲基化特异性PCR法检测TM启动子区甲基化水平；实时荧光定量PCR法检测TM mRNA表达水平；Western blotting法检测DNA甲基转移酶1(DNA methyltransferase 1,DNMT1)蛋白表达水平。结果 与对照组相比，各浓度Hcy组HUVECs凋亡率（10.04%、14.67%、16.02%、17.08%、20.78%vs. 6.32%）、DNMT1蛋白表达水平（0.96±0.07、1.43±0.09、1.43±0.09、1.04±0.10、1.08±0.15 vs. 0.56±0.05）与TM基因启动子区甲基化水平（0.68±0.09、2.90±0.25、1.43±0.03、1.30±0.05、0.91±0.11 vs. 0.31±0.08）均升高（P<0.01）,TM mRNA表达水平（0.24±0.04、0.09±0.02、0.05±0.01、0.04±0.02、0.04±0.02 vs. 2.25±0.11）下降（P<0.01）。与100μmol/L Hcy组相比，100μmol/L Hcy+FA组、100μmol/L Hcy+EGCG组HUVECs凋亡率（11.84%、8.84%vs. 14.67%）、DNMT1蛋白表达水平（0.78±0.14、0.59±0.08 vs. 1.43±0.09）与TM基因启动子区甲基化水平（0.94±0.05、0.74±0.04 vs. 1.43±0.06）均明显下降（P<0.01）、TM mRNA表达水平（0.57±0.08、1.94±0.41 vs. 0.09±0.02）明显升高（P<0.01）。结论 Hcy可通过上调HUVECs DNMT1蛋白表达水平，引起TM启动子区高甲基化，进而下调TM mRNA表达，诱导HUVECs凋亡增加。而FA和EGCG可以逆转Hcy所引起的上述改变。

• 单位
  神经内科; 内蒙古科技大学包头医学院; 内蒙古科技大学包头医学院第一附属医院; 山东大学齐鲁医院