摘要
利用CRISPR/Cas9技术敲除斑马鱼ucp2基因,研究ucp2基因在铝致斑马鱼痴呆中的作用。针对斑马鱼ucp2基因设计并制备gRNA,通过显微注射技术将gRNA与Cas9-mRNA混合注入斑马鱼单细胞胚胎中,利用酶切和基因测序筛选出发生突变的F0代斑马鱼,与野生型斑马鱼杂交得到F1代斑马鱼杂合子,分析其突变类型,将突变类型一致的斑马鱼杂合子杂交,获得F2代。在酸性AlCl3中暴露F2代斑马鱼胚胎,暴露组的斑马鱼个体行为出现异常,移动距离、移动速度和移动频率皆显著下降(P <0.01),体内活性氧(ROS)水平显著升高(P <0.01);其中KO+AlCl3组导致的异常更为明显,psen1、psen2、tnf-α和il-1βmRNA转录水平显著上调(P <0.01)。ucp2在铝致斑马鱼痴呆中起到重要作用,可能是其关键的治疗预防靶点。
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单位安徽农业大学; 药物研究所