RNAi下调Six1基因对人骨肉瘤细胞增殖和转移能力的影响

作者：谢柏臻; 陈安民; 郭风劲; 宋登新; 祁军; 朱波

来源：中国癌症杂志, 2008, (08): 561-565.

• 骨肉瘤
• Six1
• siRNA
• 增殖
• 转移
• RT-PCR
• 免疫印迹
• 裸鼠

背景与目的:Six1(sine oculis homeobox homolog1)基因的编码产物属于复合同源异型蛋白家族一员,主要参与中枢神经系统、眼、肾、肌肉等组织器官的发育。最新的研究表明Six1也参与了调控转录和细胞周期,进而发现与恶性肿瘤的发生及转移相关。在骨肉瘤中,Six1的功能还未完全明确。本研究拟对Six1在人骨肉瘤细胞增殖和转移中所发挥的作用进行初步探讨。方法:以人骨肉瘤MG-63细胞系为研究对象,针对其Six1基因序列设计小干扰RNA片段,筛选出能高效沉默目标基因的片段序列后,重组其短发夹状RNA(short hairpin RNA,shRNA)表达载体,转染入细胞,筛选出稳定表达干扰质粒的细胞克隆。用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫印迹(Western blot)方法分别检测转染后Six1的mRNA和蛋白的表达水平,四甲基偶氮唑蓝法检测增殖能力,流式细胞术检测细胞周期,并将肿瘤细胞注入裸小鼠体内进行肿瘤转移的观察。结果:RT-PCR和Western blot显示shRNA对Six1在基因和蛋白水平均有显著的下调作用。骨肉瘤细胞的生长速度减慢,处于G2-M期的细胞比例由25.62%±1.81%下降为18.25%±1.56%,处于G1期的细胞比例由57.31%±2.11%上升到65.51%±2.65%。裸鼠转移瘤实验发现转移瘤的抑制率为69.5%。结论:下调Six1基因后,骨肉瘤细胞的增殖和转移能力都得到了明显的抑制,有可能成为临床治疗骨肉瘤的靶点之一。

• 单位
  华中科技大学同济医学院附属同济医院