摘要
目的:探究高糖环境下成骨细胞中肽基精氨酸脱亚胺酶4(PAD4)表达和转录调控对成骨细胞的作用及其相关机制。方法:分别使用正常(2 g/L)和高糖(4 g/L)培养基培养hFOB1.19成骨细胞,分为正常组和高糖组;并在高糖环境下通过慢病毒将sh-PAD4和sh-NC转染至hFOB1.19成骨细胞,分为sh-PAD4组和sh-NC组;实时荧光定量PCR(RT-qPCR)和蛋白质免疫印迹法(western blotting)检测各组细胞PAD4、H3cit、NFAT2、OCN和ALP表达,染色质免疫共沉淀PCR技术(ChIP-qPCR)检测PAD4、H3cit、H3K27ac在NFAT2、OCN和ALP转录起始位点(TSS)的富集,细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测细胞增殖水平,茜素红S染色法测定细胞矿化能力。结果:与正常组比较,高糖组PAD4、H3cit、NFAT2、OCN和ALP表达升高,PAD4、H3cit、H3K27ac在NFAT2、OCN和ALP TSS富集水平增加,细胞增殖水平和矿化能力升高(P<0.05)。与sh-NC组比较,sh-PAD4组PAD4、H3cit、NFAT2、OCN和ALP表达降低,PAD4、H3cit、H3K27ac在NFAT2、OCN和ALP TSS富集水平降低,细胞增殖水平和矿化能力降低(P<0.05)。结论:高糖环境下PAD4及其介导的H3cit表达增加,后者在NFAT2、OCN和ALP TSS富集,促进成骨相关基因表达、成骨细胞增殖和分化。
-
单位海南医学院第二附属医院