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摘要
目的 研究红芪多糖(HPS)标准提取物，筛选优化其“脱蛋白-大孔吸附树脂纯化富集”的工艺方法与工艺参数。方法 以蛋白脱除率和多糖损失率为指标，比较4种不同方法的脱蛋白效果，并对筛选出的方法进行工艺参数优化；以吸附量和吸附率为指标，考察4种型号大孔吸附树脂(AB-8、D-101、NKA-9、X-5)对HPS的纯化富集效果，并进行相关工艺参数优化；采用苯酚硫酸法和考马斯亮兰法分别测定多糖和蛋白质含量；采用紫外分光光度(UV)和红外光谱(IR)法比较纯化前后多糖的基本特征。结∶果筛选出的脱蛋白方法为Sevag法，优选的树脂为AB-8大孔吸附树脂。通过工艺参数优选，确定的纯化工艺为：10 mg·mL-1粗多糖水溶液，以1/2倍体积氯仿-1，∶v/v)混合试剂进行脱蛋白操作2次；除去残留有机溶剂后，以质量浓度为1.5 mg·mL-1的水溶液，上预处理好的AB-8大孔吸附树脂柱[树脂量(g)与上样体10]∶，以2.0 mL·min-1流速循环上样2次，动态吸附后再静态吸附6～8 h，后以30%乙醇1.0 mL·min-1进行洗脱，至洗脱液无明显碱性酒石酸铜反应，收集洗脱液浓缩至与原药1冲洗沉淀，即得HPS。结论 验证试验表明，经本工艺纯化富集后，所得HPS样品纯度提高了1.27倍；UV在260,280 nm处未见蛋白质吸收峰；IR表现出更突出的多糖结构特征吸收峰，说明纯化过程有效且未对HPS主要结构产生影响。优选出的HPS脱蛋白和大孔树脂纯化工艺稳定可行，重复性较好，使多糖得到较好的纯化富集，为HPS标准提取物的形成以及其能成为制剂科学化原料药提供了研究基础。
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