缺失VIM基因大白猪肾成纤维细胞的构建及其NF-κB和MAPK信号通路的研究

作者：李凯强; 王晶; 肖伟; 任红艳; 华再东; 董发明^*; 毕延震^*

来源：中国预防兽医学报, 2022, 44(09): 970-976.

• CRISPR/Cas9
• VIM基因
• 敲除
• NF-κB
• MAPK

波形蛋白（Vimentin,VIM）可介导多种病毒进入机体，为研究病毒的感染机理，本研究将合成的敲除VIM基因的双sgRNA克隆于pX459-puro载体中，构建pX459-puro-V-1和pX459-puro-V-2敲除载体，经电转至大白猪肾成纤维细胞中，经嘌呤霉素筛选出14株单克隆细胞株。将筛选的单克隆细胞株通过PCR鉴定、测序验证、western blot鉴定，结果显示得到1株缺失VIM基因的单克隆细胞。通过100 ng/mL的脂多糖（LPS）分别刺激该单克隆细胞株和可传代大白猪肾成纤维细胞，通过western blot检测NF-κB和MAPK信号通路中p65、p38、JNK、ERK及磷酸化蛋白p-p65、p-p38、p-JNK、p-ERK的表达水平，结果显示经LPS刺激后，缺失VIM基因的单克隆细胞和可传代大白猪肾成纤维细胞中p65、p38、JNK、ERK、p-ERK的表达水平均无明显变化；缺失VIM基因的单克隆细胞中p-p65、p-p38、p-JNK的表达水平明显低于可传代大白猪肾成纤维细胞（P<0.01）。本研究得到了1株缺失VIM基因的单克隆细胞，利用该细胞株首次研究发现VIM基因缺失能够影响宿主细胞中NF-κB和MAPK信号通路中p-p65、p-p38、p-JNK的表达，从而起到降低炎症反应的作用，该缺失VIM基因的单克隆细胞为病毒感染机理的研究提供了良好的实验素材，对相关疫病的防控有重要意义。

• 单位
  动物科技学院; 河南科技大学; 湖北省农业科学院畜牧兽医研究所