过表达严重急性呼吸综合征冠状病毒2型刺突蛋白抑制人视网膜色素上皮细胞生长

作者：张宇航; 薛梦姣; 谢潇杭; 胡延忠; 张凤妍^*

来源：中华眼底病杂志, 2023, 39(03).

• 严重急性呼吸综合征冠状病毒2型
• 刺突蛋白
• 视网膜色素上皮细胞

目的观察过表达严重急性呼吸综合征冠状病毒2型(SARS-CoV-2)刺突蛋白(S-蛋白)对人视网膜色素上皮(RPE)细胞生长的抑制作用。方法构建SARS-CoV-2 S-蛋白基因片段表达质粒(p3xflag-S), 并转染至ARPE-19、HEK293细胞内, 应用DNA测序进行鉴定, 并对表达的标签蛋白进行蛋白免疫印迹法(Western blot)检测。HEK293细胞分为细胞1、2、3、4, 分别转染GFP11质粒和空载质粒、GFP1-10质粒和空载质粒、GFP11质粒和pCMV-HA-ACE2质粒、GFP1-10和p3xflag-S质粒。将细胞1与细胞2(对照组1)、细胞2与细胞3(对照组2)、细胞3与细胞4(观察组)、细胞1与细胞2、3、4(对照组3)混合共培养。明场显微镜和荧光显微镜观察细胞融合情况。将RPE细胞分为对照组、过表达S-蛋白组。流式细胞仪检测RPE细胞周期;计数试剂盒8(CCK-8)检测RPE细胞增生水平;Western blot检测RPE细胞中S-蛋白表达水平。组间比较行最小显著差法t检验。结果 DNA序列测定结果显示, S-蛋白cDNA与标签蛋白融合;Western blot检测结果显示, 与未转染p3xflag-S质粒的细胞比较, 转染HEK293细胞中S-蛋白相关表达量升高。明场显微镜下可见大而多核的融合细胞团;荧光显微镜下可见融合细胞内有多个细胞核且呈明显绿色荧光。Western blot检测结果显示, 与未转染p3xflag-S质粒的RPE细胞比较, 转染p3xflag-S质粒的RPE细胞中S-蛋白相关表达量升高。CCK-8增生分析结果显示, 与对照组比较, 过表达S-蛋白组RPE细胞增生能力显著降低, 差异有统计学意义(t=22.70、16.75、23.38, P<0.000 1)。流式细胞仪检测结果显示, 对照组、过表达S-蛋白组G1期细胞分别为41.1%、67.0%;与对照组比较, 过表达S-蛋白组G1期细胞明显升高, 差异有统计学意义(t=4.76, P=0.018)。过表达S-蛋白组细胞凋亡率较对照组明显增加, 差异有统计学意义(t=4.91, P=0.008)。结论过表达SARS-CoV-2 S-蛋白可抑制RPE细胞生长活性。

• 单位
  郑州大学第一附属医院; 郑州大学