胸苷激酶1原核表达载体的构建表达及鉴定

作者：庞丽君; 王珊珊; 吴云; 欧阳雅博; 马杰

来源：医药论坛杂志, 2015, 36(08): 6-11.

• TK1
• 克隆
• 原核表达

目的构建p ET-28a-TK1融合基因表达载体,并诱导其在大肠杆菌中表达。方法提取人肝癌细胞(Hep G2)总RNA,应用RT-PCR、PCR技术扩增出TK1目的片段,将其与带有His标签的p ET-28a连接构建重组基因并测序鉴定;用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导重组蛋白在BL21大肠杆菌中表达;最后通过SDS-PAGE及Western Blot鉴定。结果以Hep G2细胞的c DNA为模板,扩增出663bp的目的片段,将其克隆到p ET-28a原核表达载体,经酶切及DNA测序鉴定质粒构建正确;IPTG诱导后实现可溶性表达,经Western Blot鉴定为TK1融合蛋白。结论成功构建了TK1重组表达质粒,并在原核细胞中获得高效表达,为进一步开发TK1诊断试剂奠定基础。

• 单位
  北京市肝病研究所; 首都医科大学附属北京佑安医院