幽门螺杆菌HtrA的表达、纯化及结晶尝试

作者：田新利; 林玲辉; 李娜; 徐鹤; 郭菲; 刘威; 林雪霞^*

来源：中国病原生物学杂志, 2022, 17(09): 1020-1024.

DOI：10.13350/j.cjpb.220906

• 幽门螺杆菌
• HtrA
• 蛋白酶
• E-cadherin
• 结晶

目的 构建幽门螺杆菌原核表达载体，表达、纯化并筛选幽门螺旋杆菌HtrA蛋白的结晶条件，测定HtrA蛋白酶活性。方法 通过PCR技术构建幽门螺杆菌HtrA蛋白基因重组表达质粒pET-28a-HtrA,在大肠埃希菌BL21(DE3)进行重组蛋白HtrA的原核表达；经Ni离子亲和层析、凝胶过滤层析纯化蛋白；通过Hampton Research结晶试剂盒筛选HtrA蛋白结晶条件。经SDS-PAGE和质谱鉴定后通过免疫荧光法测定HtrA蛋白酶活性。结果 成功构建重组质粒pET-28a-HtrA,转化至大肠埃希菌BL21(DE3)菌株进行HtrA蛋白可溶性表达，表达蛋白分子质量约为53 ku,与预期相符；使用AKTA pure纯化目标蛋白，SDS-PAGE分析蛋白纯度达95%,产量约11 mg/L;使用结晶机器人筛选HtrA蛋白的初始结晶条件为：0.1 mol/L甘氨酸，pH 9.0,0.2%二恶烷，10%聚乙二醇。重组HtrA具有蛋白酶活性，即能切割E-cadherin。结论 利用蛋白表达、纯化和蛋白结晶技术筛选出幽门螺旋杆菌HtrA蛋白结晶条件，为其三维结构解析与功能研究奠定了基础。

• 单位
  中国人民解放军陆军军医大学; 邢台医学高等专科学校