血清7型胸膜肺炎放线杆菌apxⅡC~-/apxⅠA~+基因缺失重组菌株的构建与鉴定

作者：刘金林; 贝为成; 林荔雯; 徐引弟; 陈焕春; 梅岭

来源：微生物学报, 2007, (06): 973-977.

DOI：10.13343/j.cnki.wsxb.2007.06.031

• 胸膜肺炎放线杆菌
• 接合转移
• 负向筛选
• 重组菌株
• 构建
• 鉴定 Actinobacillus pleuropneumoniae
• transconjugation
• counterselection
• construction
• characteristics

通过接合转移和SacB负向筛选方法,成功构建了一株apxⅡC缺失的血清7型胸膜肺炎放线杆菌重组菌株。首先构建重组转移质粒pEHA1。将pEHA1转化供体菌大肠杆菌(E.coliβ2155),并将其与野生型APP血清7型亲本菌混合培养约5h,然后涂到含氯霉素抗性的培养基培养,挑取阳性克隆,接种到无抗性液体培养基,培养后涂于含有蔗糖的的固体培养基,培养一定时间后挑取蔗糖抗性的克隆,即可得到目的突变株。通过PCR、遗传稳定性、外毒素分泌、重组位点序列分析证明重组菌构建成功。通过对重组菌生物学特性进行初步研究,表明突变株生长能力未受影响,对小鼠毒力显著降低。该突变株构建体系的建立为猪传染性胸膜肺炎减毒...

• 单位
  华中农业大学; 农业微生物学国家重点实验室