缢蛏(Sinonovacula constricta)耐氨氮关联SNP验证及相关基因NKA在氨氮胁迫下的表达特征分析

作者：胡晨馨; 吕丽媛; 孙改改; 姚韩韩; 林志华^*; 董迎辉^*

来源：海洋与湖沼, 2023, 54(05): 1413-1423.

• 缢蛏
• +/K+-ATPase" name="keyword">Na+/K+-ATPase
• 氨氮排泄
• 基因表达
• RNA干扰

为筛查和验证缢蛏(Sinonovaculaconstricta)耐氨氮相关单核苷酸多态性(SNP)和基因,为分子标记辅助育种提供参考,通过竞争性等位基因特异性PCR(KASP)对位于缢蛏NKA基因(Sc-NKA)下游的SNP(g.21062868T>A)进行验证,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和蛋白免疫印迹(WB)检测高氨氮胁迫下Sc-NKA基因的表达水平,用免疫荧光技术对Sc-NKA蛋白进行组织细胞定位,通过RNA干扰探究Sc-NKA基因在氨氮排泄中的作用。结果显示,SNP位点(g.21062868T>A)与氨氮耐受性状显著相关(P<0.05); Sc-NKA基因在氨氮胁迫后的mRNA和蛋白表达量均显著增加(P<0.05);缢蛏鳃中的柱状细胞和扁平细胞是Sc-NKA蛋白分泌的主要部位,且在氨氮胁迫后细胞中的蛋白丰度增加;干扰Sc-NKA基因6～48 h后,缢蛏血淋巴中氨含量显著升高(P<0.05),且Na+-K+ -2Cl共转运蛋白1 (NKCC1)的mRNA表达水平显著降低(P<0.05)。这些研究结果表明, Sc-NKA参与氨氮的排泄过程,且与NKCC1在氨氮转运中具有协同作用。

• 单位
  浙江万里学院; 宁波大学