针对猪瘟病毒Erns基因实时荧光定量PCR检测方法的建立与应用

作者：王树茂; 王桂花; 王安冉; 周艳君; 姜一峰; 乔思娜; 赵款; 童光志; 李丽薇^*; 高飞^*

来源：中国兽医科学, 2023, 53(12): 1488-1494.

DOI：10.16656/j.issn.1673-4696.2023.0212

• 猪瘟病毒
• Erns基因
• 荧光定量PCR

为建立针对猪瘟病毒(CSFV)的快速诊断方法,根据猪瘟病毒石门强毒株(GenBank ID:AF092448.2)已公布的Erns基因序列设计并合成特异性引物及探针,建立针对Erns基因的TaqMan荧光定量PCR检测方法,验证其特异性、敏感性、重复性,并进行临床样品及重组病毒的检测。结果显示,建立的TaqMan荧光定量PCR检测方法的Ct值与标准品在1×109～1×102 copies/μL范围内具有很好的线性关系,相关系数为0.99,斜率为-3.661 5,检测下限为1.0×101 copies/μL,与其他能引起相似临床症状的猪源病毒无交叉反应。重复性试验结果显示,组间与组内变异系数均小于2.925 02%,证实该方法重复性好。本方法适用于临床样品中CSFV抗原核酸的检测,同时也可以用于CSFV在细胞上增殖情况的检测和本实验室构建的表达CSFV Erns基因的重组猪繁殖与呼吸综合征病毒的鉴定及检测,对于临床上CSFV抗原检测、CSF诊断及CSFV的实验室研究有重要意义。

• 单位
  中国农业科学院上海兽医研究所; 江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心; 动物科技学院; 山东农业大学; 河北农业大学