人可溶性生长刺激表达基因2蛋白的真核表达、纯化和鉴定

作者：汪慧; 张天成; 凌薇; 陈盛霞; 姜旭淦^*

来源：临床检验杂志, 2020, 38(02): 137-141.

DOI：10.13602/j.cnki.jcls.2020.02.14

• 人可溶性生长刺激表达基因2蛋白
• 真核表达
• 蛋白质纯化

目的构建人可溶性生长刺激表达基因2(sST2)蛋白的重组真核表达载体,获得高纯度的人sST2重组蛋白。方法根据人sST2基因序列设计引物,利用RT-PCR技术获得人sST2基因;构建人sST2-pcDNA3.1-his(-)重组真核表达载体;脂质体法转染COS7细胞,表达人sST2重组蛋白,并用镍柱亲和层析法纯化;用western blot和ELISA法对人sST2重组蛋白进行鉴定。结果 PCR扩增产物用琼脂糖凝胶电泳分析,结果显示产物长度与预期一致,约为1 000 bp;同源性比对分析结果显示,人sST2基因成功插入PGH-T载体;用BamHⅠ和HindⅢ对重组真核表达载体双酶切后凝胶电泳分析,结果显示产物电泳位置与预期一致;表达产物经SDS-PAGE电泳结果显示在相对分子质量(Mr)约为65 000处有一明显条带,与预期蛋白质位置一致;western blot鉴定结果显示人sST2重组蛋白有His标签,ELISA鉴定结果显示人sST2重组蛋白有与抗sST2抗体结合的特异性抗原表位。结论通过重组DNA技术成功构建人sST2基因重组真核表达载体,通过蛋白质纯化技术成功获得人sST2重组蛋白。

• 单位
  江苏大学