摘要
目的研究ERK2抑制剂VX-11e对寨卡病毒的吸附、复制的影响,检测相关基因的表达以确定其作用机制。方法采用MTT法检测VX-11e对细胞的毒性。对HBMEC和Vero细胞进行不同浓度以及在不同孵育病毒时间段VX-11e处理,在不同的时间点收样并提取细胞RNA与总蛋白,应用实时荧光定量PCR检测病毒E基因、ERK、RSK、TYRO3、AXL mRNA的表达量,应用免疫荧光印迹试验检测病毒NS1蛋白、ERK与RSK总蛋白及其磷酸化蛋白的表达量,分析VX-11e对寨卡病毒复制的影响。结果 HBMEC和Vero细胞在0~15μmol/L VX-11e作用下存活率均大于90%。寨卡病毒感染HBMEC和Vero细胞后加入VX-11e,细胞内的病毒mRNA与蛋白表达水平均显著下降,随着药物浓度的增加病毒表达量也随之减少。同时VX-11e会引起ERK与RSK的mRNA、总蛋白与磷酸化蛋白表达水平不同程度下降,具有浓度依赖性。但对AXL与TYRO3的mRNA表达水平无显著影响。只在孵育病毒前与孵育过程中加入VX-11e,病毒表达量不受影响,孵育病毒后加入药物组病毒mRNA表达水平大幅减少。结论 VX-11e对HBMEC和Vero细胞在一定的浓度范围内无明显毒性,在此浓度范围内药物对寨卡病毒具有明显的复制抑制作用,并且具有浓度依赖性。VX-11e不影响病毒对细胞的粘附,主要是通过抑制病毒在细胞内的复制起抑制病毒增殖的作用,在mRNA和蛋白质水平上抑制细胞ERK和RSK的表达。
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单位南方医科大学; 公共卫生学院