鸡毒支原体和鸡滑液囊支原体TaqMan-MGB双重荧光定量PCR检测方法的建立和应用

作者：韩勇; 刘玉洁; 马珍驰; 吕桂霞; 范承祥; 任增超; 吴凤笋

来源：中国家禽, 2022, 44(12): 59-64.

DOI：10.16372/j.issn.1004-6364.2022.12.010

• 鸡毒支原体
• 鸡滑液囊支原体
• 荧光定量PCR
• 净化

为建立一种快速鉴别诊断鸡毒支原体和鸡滑液囊支原体的方法，试验针对鸡毒支原体pvpA基因和鸡滑液囊支原体vlhA基因保守序列，分别设计引物和TaqMan-MGB探针；人工合成包含荧光PCR扩增目的基因的序列，并与载体连接后构建重组质粒MG-pvpA和MSvlhA，测序正确后作为标准质粒；优化反应条件建立了MG和MS的TaqMan-MGB双重荧光定量PCR方法，对方法的敏感性、特异性、重复性进行评价并利用该方法对临床样本进行检测。结果显示，该方法特异性良好，与其他常见鸡病原不发生交叉反应，检测MG-pvpA、MS-vlhA的灵敏度分别达到1.58×101拷贝/μL、1.21×101拷贝/μL，批内与批间的变异系数均小于2%，从36份临床样品中分别检出MG和MS阳性样品11份、8份，与商品荧光PCR试剂盒符合率达到100%。研究表明建立的TaqMan-MGB双重荧光定量PCR方法特异性强、重复性好、敏感性高，可用于检测临床样品，快速准确地鉴别MG和MS，有利于鸡群中支原体的监测和净化。

• 单位
  河南牧业经济学院