重组蛋白sHLA-G1的原核表达与纯化

作者：张劲; 郭霭光; 丰美福

来源：西北农林科技大学学报(自然科学版), 2007, (08): 180-184.

DOI：10.13207/j.cnki.jnwafu.2007.08.008

• HLA-G
• 原核表达
• 重组蛋白
• 包涵体 HLA-G
• prokaryotic expression
• recombinant protein
• inclusion body

为了进一步在蛋白质水平对人白细胞抗原HLA-G进行分析,利用已经构建好的克隆质粒pGEM-T-HLA-G1,进一步构建了重组原核表达质粒pET28a-sHLA-G1。SDS-PAGE检测表明,重组蛋白sHLA-G1在大肠杆菌(E.coli)中得到稳定表达,原核表达的重组蛋白sHLA-G1主要以包涵体形式存在。包涵体蛋白经充分洗涤、尿素溶解后用钴离子树脂纯化,并用SDS-PAGE和Western印迹进行了分析,鉴定结果表明,该蛋白纯度达到90%以上,并能与HLA-G特异性抗体87G反应。该研究结果为进一步的复性工作奠定了基础。

• 单位
  中国科学院动物研究所; 生命科学学院; 膜生物学国家重点实验室; 西北农林科技大学