3D聚合酶突变对肠道病毒A组71型复制影响的研究

作者：朱颖; 翁育伟^*

来源：中国人兽共患病学报, 2021, 37(12): 1078-1083.

• 肠道病毒A组71型
• 3D聚合酶
• 突变
• 病毒拯救
• 病毒复制

目的研究3D聚合酶(3D polymerase,3Dpol)突变对肠道病毒A组71型(Enterovirus A71,EV-A71)复制的影响。方法扩增EV-A71病毒基因组并克隆至TOPO-XL2-PCR载体;应用体外点突变方法在病毒3Dpol区引入N16S和I256V突变;采用T7聚合酶转录病毒基因组RNA并转染RD细胞,获得N16S和I256V病毒突变株。观察亲本病毒与突变病毒株的增殖特征以及病毒RNA含量。结果 RNA转染RD细胞后可获得具有感染性的病毒。体外增殖试验显示,正常培养条件下(36.5℃)3株病毒增殖趋势一致,感染细胞72 h后病毒滴度和RNA拷贝数均达到峰值且组间差异无统计学意义。温度敏感性试验显示,与正常培养条件比较,病毒在高温(39.5℃)的滴度和RNA拷贝数均大幅下降,并且高温对N16S和I256V突变株的增殖抑制较亲本株更为显著。结论成功构建EV-A71感染性克隆并获得病毒突变株,3Dpol的N16S和I256V突变在高温条件下可能进一步降低病毒复制能力。

• 单位
  福建省疾病预防控制中心