H5N1(NIBRG-14)流感病毒疫苗株在无血清悬浮培养MDCK细胞中传代稳定性的评价

作者：张国梅; 乐洋; 张哲罡; 马宁; 李雪丹; 周蓉; 贾兰馨; 郑嘉昊; 张家友; 杨晓明^*

来源：中国生物制品学杂志, 2023, 36(07): 769-774.

DOI：10.13200/j.cnki.cjb.003958

• MDCK细胞
• H5N1型流感病毒
• 传代
• NIBRG-14毒株
• 稳定性

目的 评价H5N1(NIBRG-14)流感病毒疫苗株在无血清悬浮培养MDCK细胞（sMDCK）中的传代稳定性。方法 将H5N1(NIBRG-14)流感病毒疫苗株工作种子批在sMDCK细胞中连续传15代。采用二代及一代测序法检测主种子批、工作种子批、P1、P2、P3、P5、P10和P15代病毒HA、NA、M、NP、NS、PA、PB1、PB2 8段基因核苷酸序列的稳定性；以肽段覆盖率为指标评价工作种子批、P5、P15代病毒主要抗原血凝素（hemagglutinin,HA）和神经氨酸酶（neuraminidase,NA）蛋白氨基酸序列的稳定性；选取工作种子批、P5和P15代病毒制备流感疫苗，经肌内免疫雌性BALB/c小鼠，每组10只，15μg HA/只，28 d后加强免疫1次，剂量及给药途径同初次免疫，于初次免疫后28、42、56 d，检测血清中和抗体效价，评价免疫原性的稳定性。结果 各代次流感病毒均未检测到片段插入或缺失，核苷酸序列与主种子批序列完全一致；主种子批、工作种子批、P1、P2、P3、P5、P10代病毒均未发生单核苷酸多态性（single nucleotide polymorphism,SNP）突变，但P15代病毒多个基因位点存在SNP突变的可能性，其中杂合SNP数占91.62%。P5和P15代病毒的HA、NA蛋白肽段覆盖率为96.7%～100%。初次免疫后28、42、56 d，工作种子批、P5和P15代病毒免疫小鼠血清中和抗体效价差异均无统计学意义（H分别为2.253、2.029、1.408、P分别为0.324、0.363、0.495）。结论 H5N1(NIBRG-14)流感病毒疫苗株在sMDCK细胞中具有良好的遗传稳定性，有望应用于sMDCK细胞基质大流行流感疫苗的生产。

• 单位
  武汉生物制品研究所有限责任公司