结核分枝杆菌ESAT-6蛋白在毕赤酵母中的融合表达及其活性研究

作者：刘林; 赵志安; 王洪海; 宋大新

来源：生物工程学报, 2004, (06): 958-962.

DOI：10.13345/j.cjb.2004.06.031

• ESAT-6蛋白
• 人α-2a干扰素
• 分泌型载体
• 酵母SMD1168
• 融合表达 ESAT-6
• IFN α-2a
• secretion vector
• yeast SMD1168
• fusion expression

为了获得结核分枝杆菌ESAT 6蛋白在毕赤氏酵母中的高效表达 ,将人α 2a干扰素基因、结核分枝杆菌esat 6基因经PCR扩增并加上相应的酶切位点 ,两基因之间的DNA接头编码肠激酶识别的多肽 ,DNA经酶切连接插入分泌型载体pPIC9K ,将重组表达质粒pPIC9K α2a esat6用SalⅠ单酶切之后 ,电击转入PichiapastorisSMD116 8中 ,采用G4 18梯度筛选获得高抗性转化子。以甲醇作为诱导物 ,发酵 4d后取上清 ,进行SDS PAGE和Westernblot鉴定并分析表达产物的干扰素活性。结果表明 ,重组菌株成功地分泌表达了分子量大小约为 30kD的融合蛋白...

• 单位
  生命科学学院; 复旦大学