探讨桃红饮体外通过VEGFC通路对巨噬细胞介导的淋巴管生成的抑制作用

作者：李斯锦; 冯骁腾; 王怡茹; 刘萍^*

来源：北京中医药大学学报, 2023, 46(12): 1670-1683.

• 桃红饮
• 动脉粥样硬化
• RAW264.7巨噬细胞
• 小鼠淋巴管内皮细胞
• 淋巴管
• 羟基红花黄色素A

目的 探讨桃红饮(桃仁、红花、川芎、当归尾、威灵仙)治疗动脉粥样硬化，调控巨噬细胞介导的淋巴管生成的分子机制。方法 采用超高效液相色谱质谱法鉴定桃红饮有效成分。以慢病毒转染方法，构建血管内皮生长因子C(VEGFC)基因过表达的RAW264.7巨噬细胞(OE-VEGFC)与空载体对照RAW264.7巨噬细胞(OE-VEHICLE)。用人氧化低密度脂蛋白(20 mg/L)与脂多糖(100μg/L)干预RAW264.7巨噬细胞或OE-VEGFC构建动脉粥样硬化细胞模型(造模RAW264.7及造模OE-VEGFC)。CCK-8法测定桃红饮的最佳给药质量浓度。构建RAW264.7巨噬细胞与小鼠淋巴管内皮细胞(MLECs)Transwell共培养模型。划痕实验检测细胞损伤修复情况；结晶紫染色检测细胞的迁移情况；管形成实验测定细胞的管腔形成能力；酶联免疫吸附剂测定法检测细胞上清液中VEGFC、白细胞介素6(IL-6)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的含量；免疫荧光标记法检测细胞VEGFC含量；实时荧光定量PCR检测VEGFC、淋巴管内皮细胞表面受体(FLT4)、平足蛋白(PDPN)、IL-6、iNOS的mRNA表达；蛋白质印迹法检测VEGFC、FLT4、HIF-1α、淋巴管内皮透明质酸受体-1(LYVE-1)、同源异型盒基因转录因子-1(Prox-1)、IL-6、iNOS的蛋白表达。结果 桃红饮中含有22种主要有效成分，其中，羟基红花黄色素A(23.3%)及D-苦杏仁苷(23.8%)含量较高。选择20 mg/L作为桃红饮的给药最佳质量浓度。OE-VEGFC及OE-VEHICLE转染效率为80%以上，OE-VEGFC巨噬细胞构建成功。与正常对照组相比，造模RAW264.7组MLECs向划痕区域愈合的速度增快、细胞迁移数增多、管腔生成数增加(均P<0.05),VEGFC荧光表达量增加，细胞上清中VEGFC、IL-6、iNOS含量增加(均P<0.05),VEGFC、FLT4、PDPN、IL-6、iNOS的mRNA表达增加(均P<0.05),VEGFC、FLT4、HIF-1α、LYVE-1、Prox-1、IL-6、iNOS的蛋白表达增加(均P<0.05);桃红饮可逆转上述指标(均P<0.05)。造模OE-VEGFC组与造模RAW264.7组相比，上述指标增加(均P<0.05);与桃红饮+造模RAW264.7组相比，桃红饮+造模OE-VEGFC组上述指标增加(均P<0.05);与造模OE-VEGFC组比较，桃红饮+造模OE-VEGFC组上述指标减少(均P<0.05)。结论 桃红饮可能通过抑制VEGFC通路减少巨噬细胞介导的淋巴管形成。

• 单位
  上海中医药大学附属龙华医院