摘要
为挖掘边缘革蜱谷胱甘肽硫转移酶(glutathione S-transferase, GST)家族功能基因,根据边缘革蜱转录组数据信息设计引物,对边缘革蜱6种GST基因进行扩增、克隆、序列测定,测序后进行比对、绘制系统进化树,进行生物信息学分析及抗原性预测;根据系统进化分析,选择4个不同亚型进行原核表达及鉴定。结果显示,经试验筛选了6种边缘革蜱GST功能基因,根据构建出的系统进化树将其命名为DmGSTE2、DmGSTE3、DmGSTK1、DmGSTM5、DmGSTM6和DmGSTZ2,将6种功能基因序列上传至NCBI的GenBank;获得的6种GST均为非过敏原;DmGSTM6有信号肽,存在跨膜区,其他GST皆无信号肽、无跨膜区、无明显疏水区,均为亲水性蛋白;DmGSTM5和DmGSTK1抗原性较强,DmGSTE2抗原性最弱。筛选构建并表达了4种不同亚型的GST,获得了相应重组蛋白。Western blot发现重组蛋白能够与相应蛋白免疫过的阳性鼠血清发生反应,说明具有一定的免疫原性和反应原性。试验结果可为边缘革蜱GST家族抗蜱候选疫苗筛选等深层研究奠定基础。
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