蛋氨酸合酶活性筛选体系的建立

作者：郭莹; 李超; 张志丽; 田超; 王孝伟; 刘俊义

来源：药学学报, 2012, (11): 1463-1469.

DOI：10.16438/j.0513-4870.2012.11.017

• 蛋氨酸合酶
• 蛋白层析
• 分离纯化
• 酶促反应动力学
• 叶酸拮抗剂 methionine synthase
• protein chromatography
• separation and purification
• enzyme kinetics
• antifolate

钴胺素依赖的蛋氨酸合酶催化N5-甲基四氢叶酸转移甲基至同型半胱氨酸生成蛋氨酸和四氢叶酸,直接参与蛋氨酸循环、叶酸循环及含硫氨基酸代谢,与DNA、蛋白质合成及生物甲基化有密切关系。本研究采用蛋白层析技术,将大鼠肝匀浆经超声破碎和高速离心处理后,依次经过DE-52批处理、Q Sepharose Fast Flow离子交换层析和CHT陶瓷羟基磷灰石吸附柱层析进行纯化,并对纯化产物进行了SDS-PAGE和Western blotting鉴定。采用分光光度法测定蛋氨酸合酶的活性,对纯化酶的酶促反应动力学进行了研究,确定了最佳反应条件,动力学结果显示蛋氨酸合酶的双底物酶促反应的机制为乒乓机制。研究表明,采...

• 单位
  北京大学; 天然药物与仿生药物国家重点实验室