Raldh2沉默对P19细胞向心肌样细胞分化的影响（英文）

作者：张雅雯; 杨倩; 王凤; 张立凤

来源：复旦学报(医学版), 2019, 46(06): 733-743+775.

• 视黄醛脱氢酶(Raldh)
• 视黄酸
• 心肌样细胞
• 细胞分化
• P19细胞

目的深入心脏发育相关基因表达层面,研究视黄酸代谢中的关键基因视黄醛脱氢酶2 (retinaldehyde dehydrogenase 2,Raldh2)在P19细胞中的表达并探讨对其心肌样分化的影响机制。方法构建miRNA干扰质粒转染P19细胞以使Raldh2表达降低,qPCR检测miRNA对Raldh2在P19细胞中的敲低效率,利用杀稻瘟菌素筛选出稳定低表达Raldh2的细胞株,加入二甲基亚砜以诱导P19细胞分化为心肌样细胞,qPCR检测心肌发育相关基因在心肌样分化各时期的表达水平。结果成功构建Raldh2低表达的稳定P19细胞株MiRaldh2,敲低效率达91%(t=25.52,P<0.000 1,95%CI:0.81～1.01);在整个分化过程中,MiRaldh2组部分心脏相关转录因子的mRNA水平普遍低于P19组,尤其在第7天,MiRaldh2组Gata 4、Tef-1、N-myc、α-mhc和Ctnt的相对表达率分别为P19组的0.16±0.01 (t=17.29,P<0.000 1)、0.51±0.02 (t=3.564,P=0.023 5)、0.23±0.01 (t=13.17,P=0.000 2)、0.20±0.02 (t=17.76,P<0.000 1)和0.59±0.06 (t=3.642,P=0.021 9),然而对于Nkx2.5和Hand2的mRNA水平,MiRaldh2组在第2～7天显著升高,第7天的表达率分别为P19组的2.25±0.35 (t=3.526,P=0.024 3)和3.58±0.20 (t=9.214,P=0.011 6)。结论敲低Raldh2基因可抑制P19细胞向心肌样细胞的分化,Raldh2可能对心脏早期发育具有重要作用,其低表达可能是维甲酸缺乏引起心脏畸形的原因之一。

• 单位
  复旦大学附属儿科医院