基于预孵法纯化培养小鼠原代视网膜微血管周细胞

作者：刘光辉; 林翠红; 杨田野; 徐朝阳; 郑永征; 赵利; 孟春; 潘铭东^*

来源：中华实验眼科杂志, 2019, (10).

• 视网膜微血管周细胞
• 预孵
• 分离
• 纯化
• 培养

目的 建立简便的小鼠原代视网膜微血管周细胞(RMPs)分离、纯化、培养方法。方法 在体视显微镜下机械分离获取小鼠视网膜,并碎化、胶原酶消化、过滤处理,收集视网膜碎片,预孵24 h后用接种于含有体积分数20%胎牛血清的低糖型DMEM 6孔板进行培养,并采用差异消化法纯化原代RMPs。通过倒置相差显微镜观察细胞形态,免疫荧光法鉴定周细胞标志物,周细胞/内皮细胞共培养系统鉴定周细胞的功能。结果 经预孵的视网膜碎片再次孵育24 h后,细胞开始从视网膜碎片中迁移出,逐渐增生形成大小不一的细胞集落。原代或子代细胞胞体呈不规则三角形,多个长突触,无接触性抑制。免疫荧光显示第3代细胞绝大部分α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、血小板源性生长因子受体β(PDGFR-β)表达阳性,极少部分胶质纤维酸性蛋白(GFAP)表达阳性,von Willebrand因子(vWF)表达阴性,RMPs纯度达97%以上。体外培养的小鼠RMPs能被血管内皮细胞所募集,共同形成微血管样条索。结论 本实验成功建立了一种简便的小鼠原代RMPs分离、纯化、培养方法,所培养的小鼠原代RMPs为功能性RMPs。

• 单位
  福建中医药大学; 福州大学