鸽avUCP基因克隆、原核表达与多抗制备

作者：李晨星; 潘广伟; 宋思进; 李双; 唐赛仙; 赵雪娇^*

来源：安徽农学通报(上半月刊), 2020, 26(23): 11-16.

DOI：10.16377/j.cnki.issn1007-7731.2020.23.005

• 鸽
• avUCP
• 基因克隆
• 原核表达
• 多克隆抗体

解偶联蛋白(uncoupling proteins,UCPs)是线粒体内膜上具有调节质子跨膜转运作用的转运蛋白,在细胞的产热、氧化还原、活性氧产生等许多细胞过程中起着关键作用。鸟类解偶联蛋白(avian uncoupling protein avUCP)通过调控脂类利用和细胞代谢产热参与机体的脂肪代谢和能量平衡,多种环境和激素因子调控其转录和翻译水平。为了更好地理解av UCP参与鸟类代谢产热的分子机理,该研究以鸟类模式生物之一鸽为实验材料,克隆了鸽avUCP基因的部分保守序列,基于原核表达系统,构建了pET32a-avUCP原核表达载体,成功表达了鸽avUCP重组融合蛋白,经Ni2+亲和层析法纯化重组蛋白,SDS-PAGE结果显示,所得到的目标蛋白分子量与预测值一致,表明纯化得到了高纯度目标蛋白。以目标蛋白为抗原免疫新西兰大白兔,5免后制备抗血清,ELISA检测结果显示效价为1∶51200。Western blot检测结果表明,该抗体不仅可以免疫结合重组avUCP蛋白,而且与鸽(Columba)、画眉(Garrulax canorus)和灰背椋鸟(Sturnus sinensis)骨骼肌中的avUCP抗原蛋白同样具有良好的特异性免疫反应,说明制备的抗体具有较好的特异性和保守性。该研究将为分子水平研究鸟类能量代谢的规律和调控机理提供必要的抗体基础。

• 单位
  生物工程学院; 大庆师范学院