携带Pdcd5基因的三调控增殖性腺病毒的构建及鉴定

作者：谢敏; 吴红平; 李琳芳; 牛继红; 常艳; 李金兰; 黄晓军; 阮国瑞

来源：中国实验血液学杂志, 2009, 17(03): 643-649.

• pdcd5基因
• 基因治疗
• 条件增殖性腺病毒
• 白血病

本研究旨在构建一种表达pdcd5基因的三调控增殖性腺病毒。应用DNA重组技术将pdcd5 cDNA插入三调控条件增殖性腺病毒SG600的E3区,SG600病毒系统是运用人端粒酶反转录酶基因启动子(hTERTp)和缺氧反应元件(HRE)分别调控病毒复制必须基因E1a和E1b的表达,去除E1a基因CR2区中24个核苷酸而构建成的靶向肿瘤细胞增殖的病毒系统。采用酶切及PCR鉴定并筛选重组成功的质粒。荧光显微镜下观察带增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因的重组腺病毒SG611-EGFP对白血病细胞系的感染效率。实时定量PCR检测感染重组腺病毒SG611-pdcd5的K562细胞pdcd5的表达水平。结果显示,构建的SG611-pdcd5病毒能扩增出hTERTp、HRE、pdcd5基因以及腺病毒骨架和11型纤突结基因序列。SG611-EGFP对白血病细胞系K562和MEG-01的感染效率均能达到70%以上。感染SG611-pdcd5的K562细胞pdcd5的表达水平较SG611空载体和携带pdcd5的非增殖性腺病毒(Ad-pdcd5)明显增加(p<0.001),其表达水平随感染复数增加而升高。结论:成功构建了三调控增殖性腺病毒SG611-pdcd5,后者能高效感染白血病细胞系并高效表达pdcd5,为进一步运用pdcd5靶向肿瘤细胞进行基因治疗的研究提供了基础。

• 单位
  北京大学人民医院; 中国人民解放军第二军医大学