基于巨噬细胞焦亡探讨心脉康方抗动脉粥样硬化机制

作者：冯文伟; 叶健烽; 吕洪雪; 周智慧; 陈丽萍; 叶小汉^*

来源：广州中医药大学学报, 2022, 39(10): 2374-2386.

DOI：10.13359/j.cnki.gzxbtcm.2022.10.026

• 心脉康方
• 动脉粥样硬化
• 细胞焦亡
• TLR4/NLRP3信号通路
• 巨噬细胞

【目的】 探讨心脉康方(由鳖甲、三棱、莪术、牡蛎、地龙、枳实、胆南星、党参等组成)对动脉粥样硬化的防治作用及机制。【方法】 J774A.1巨噬细胞实验分为对照组(10%胎牛血清)，氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)组[100 μg·mL-1ox-LDL]，阿托伐他汀组(100 μg·mL-1ox-LDL+ 10%阿托伐他汀含药血清)，心脉康方低、中、高浓度组(100 μg·mL-1ox-LDL+相应 5%、10%、20%的心脉康方含药血清)，阿托伐他汀+ Toll 样受体 4(TLR4)组(100 μg·mL-1ox-LDL+10%阿托伐他汀含药血清+2 μg·mL-1TLR4过表达质粒)，心脉康方+ TLR4组(100 μg·mL-1ox-LDL+20%的心脉康方含药血清+2 μg·mL-1TLR4过表达质粒)，各组细胞加药处理 48 h 后进行后续实验。采用油红 O 染色法观察巨噬细胞泡沫化，采用生化法检测细胞中总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、游离胆固醇(FC)以及胆固醇酯(CE)水平，采用实时定量多聚酶链反应(qPCR)检测细胞中白细胞介素 1β(IL-1β)、白细胞介素 18(IL-18)、TLR4、核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白 3(NLRP3)、含 CARD 结构域的凋亡相关颗粒样蛋白(ASC)和半胱氨酸蛋白水解酶 1(Caspase-1)mRNA 表达水平，采用 Western Blot 法检测细胞中 IL-1β、IL-18、消皮素 D-N 端(GSDMD-N)、TLR4、NLRP3、ASC 和 Caspase-1 蛋白水平，采用碘化丙啶(PI)染色法观察细胞焦亡情况，采用微量酶标法检测细胞上清乳酸脱氢酶(LDH)含量。【结果】 心脉康方含药血清能够抑制 ox-LDL 诱导巨噬细胞脂质累积、泡沫化、焦亡和炎症反应，并呈一定浓度依赖性；心脉康方含药血清能够抑制 ox-LDL 诱导的 TLR4/NLRP3 信号通路的激活；TLR4过表达能够逆转心脉康方含药血清对 ox-LDL 诱导的巨噬细胞脂质积聚、泡沫化、焦亡和炎症反应的抑制作用。【结论】心脉康方可能通过下调TLR4/NLRP3信号通路，抑制ox-LDL诱导的巨噬细胞焦亡，从而改善动脉粥样硬化。

• 单位
  广州中医药大学