重组腺病毒Adeasy-HA117载体的构建及其在K562细胞的表达

作者：郭玉霞; 金先庆; 罗庆; 郑改焕; 于洁; 刘筱梅; 温贤浩; 徐酉华

来源：郑州大学学报(医学版), 2009, (03): 513-516.

DOI：10.3969/j.issn.1671-6825.2009.03.019

• 耐药相关基因HA117
• 腺病毒
• K562细胞

目的:构建携带耐药相关基因HA117的高滴度重组腺病毒,转染K562细胞,检测其在K562细胞中的表达情况。方法:用基因工程技术将ATRA相关耐药新基因HA117的cDNA亚克隆至穿梭质粒pAdTrack-CMV上,然后在细菌内与pAdeasy同源重组,后将重组腺病毒Adeasy-HA117经脂质体转染包装细胞HEK293,并收获原代的重组腺病毒Ad5easy-HA117,经乒乓交互感染的方法扩增原代腺病毒,应用RT-PCR、荧光显微镜及流式细胞仪鉴定和检测重组腺病毒感染K562细胞后HA117的表达情况。结果:酶切鉴定及PCR结果证明ATRA相关耐药新基因HA117重组腺病毒载体构建成功,携带新基因HA117重组腺病毒载体的效价达8.3×1011pfu/mL。RT-PCR检测到转染后K562细胞内HA117的表达。结论:成功获得携带新基因HA117的重组腺病毒,并能使其在K562细胞中高表达。

• 单位
  重庆医科大学附属儿童医院