阻断剂单克隆抗体制备及表达工艺优化

作者：崔亚敏; 李昕益; 田晓平; 孙静静; 宋子博; 周雷鸣; 赵巧辉^*; 李桂林

来源：生物技术, 2023, 33(05): 551-557.

DOI：10.16519/j.cnki.1004-311x.2023.05.0082

• 阻断剂单克隆抗体
• CHO-S细胞
• 稳定细胞株
• DOE实验设计
• 生物反应器

[目的]体外制备阻断剂单克隆抗体，并对表达工艺进行优化。[方法]通过RLM-RACE技术钓取杂交瘤细胞抗体基因序列，经分子克隆构建至真核表达载体pCHO1.0,在CHO-S细胞中构建稳定表达细胞株；运用DOE实验设计方法，筛选最佳培养基、培养温度及补料方式；在5 L生物反应器进行工艺验证，蛋白A亲和纯化后用化学发光法进行阻断性能验证。[结果]目的基因序列钓取成功，稳定表达单克隆细胞株11H7表达量为2.90 g/L;使用CHO Max A培养基、梯度补料策略、32℃培养可将表达量提升至5.28 g/L,5 L生物反应器表达量为5.47 g/L,纯度均>95%,且在磁微粒G17和ProGRP项目异常样本中检测满足阻断性能需求。[结论]阻断剂单克隆抗体构建成功，通过表达工艺优化，表达量由2.90 g/L提升至5.28 g/L,且在生物反应器中得到初步验证。