nm23-H1基因转染前后人大细胞肺癌细胞株抑制消减cDNA文库的构建

作者：叶苏娟; 冯志华; 朱文; 蔡春季; 李潞; 孙丽亚; 万海粟; 马力; 周清华

来源：中国肺癌杂志, 2010, (04): 482-488.

• 肺肿瘤
• nm23-H1基因
• 抑制消减杂交
• cDNA文库
• 转移相关基因

背景与目的已有的研究表明,nm23-H1基因是一个重要的肺癌转移抑制基因,为了筛选与该基因表达相关的差异表达基因,本研究拟构建nm23-H1基因转染前后人大细胞肺癌细胞株(L9981和L9981-nm23-H1)差异表达基因的抑制消减cDNA文库,为进一步筛选、克隆与nm23-H1转移相关的基因奠定基础。方法利用抑制消减杂交(suppressive subtractive hybridization,SSH)技术构建nm23-H1基因转染前后人大细胞肺癌细胞株(L9981和L9981-nm23-H1)间差异表达基因的正向和反向消减cDNA文库,经蓝白菌落筛选克隆,并PCR反应鉴定。结果成功构建了该两株细胞株差异表达基因的正向和反向消减cDNA文库。经蓝白菌落筛选,正向消减文库总共获得约300个白斑克隆,反向消减文库总共获得约400个白斑克隆,从正反向消减文库中各挑选96个克隆进行PCR扩增检测是否有插入片段,结果显示在挑选的正向文库中有84个克隆有插入片段,反向文库中有83个克隆有插入片段,其片段大小范围为(300-750)bp。结论抑制消减杂交是克隆差异表达基因的有效方法,我们应用SSH法和T/A克隆技术成功建立了nm23-H1基因转染前后人大细胞肺癌细胞株(L9981和L9981-nm23-H1)差异表达基因的抑制消减cDNA文库。nm23-H1基因在肺癌细胞中的表达可能影响某些转移相关基因的差异表达。

• 单位
  生物治疗国家重点实验室; 四川大学华西医院; 天津医科大学总医院