应用Surrogate报告载体提高CRISPR/Cas9对TMEM215基因的打靶效率

作者：高晓彤; 付伟; 陈娟娟; 胡彬; 李丹慧; 黄斯勇; 李国辉; 张阳萍; 刘利; 梁英民

来源：现代生物医学进展, 2016, 16(04): 652-700.

DOI：10.13241/j.cnki.pmb.2016.04.012

• TMEM215基因
• CRISPR/Cas9
• Surrogate报告系统

目的:构建Surrogate报告载体,并利用Surrogate报告载体提高CRISPR/Cas9对HEK293T细胞TMEM215基因打靶效率。方法:构建针对人TMEM215的CRISPR/Cas9表达载体及相应Surrogate报告载体,两者共转HEK293T细胞,通过流式分析、T7EI检测、TA克隆测序等明确Surrogate报告载体对不同sgRNA打靶效率的检测及对基因修饰细胞的筛选富集作用。结果:流式分析结果表明,Surrogate报告载体成功检测出不同sgRNA的打靶效率,并筛选出高效率sgRNA;T7EI检测及TA克隆测序显示,外加嘌呤霉素抗性筛选时,Surrogate报告载体可有效富集基因修饰细胞。结论:成功构建Surrogate报告载体,并利用Surrogate报告载体提高CRISPR/Cas9对HEK293T细胞TMEM215基因的打靶效率。

• 单位
  唐都医院; 解放军第421医院; 解放军第44医院; 第四军医大学