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摘要
目的探讨海马内注射酪氨酸激酶受体结合蛋白B3(Ephrin-B3)激动剂对癫痫模型大鼠自发性痫性发作及海马组织分泌型糖蛋白Reelin及磷酸化接头蛋白(p-Dab1)表达的影响。方法将78只大鼠按照体质量匹配原则随机分成对照组和模型组, 每组39只。对照组大鼠正常饲养, 模型组大鼠采用氯化锂-匹罗卡品注射法建立大鼠癫痫模型, 在癫痫持续状态诱导成功后的急性期(7 d), 静止期(14 d)和慢性期(60 d)取海马组织, 采用免疫组化及蛋白质免疫印迹法(Western blot)检测癫痫模型大鼠和正常大鼠海马组织Reelin蛋白及p-Dab1蛋白表达变化, 每个时间点每组随机选取13只大鼠。另取48只大鼠, 按照随机数字表法分为正常对照Fc-control组、正常对照EphB3-Fc组、癫痫Fc-control组和癫痫EphB3-Fc组, 每组12只, 前两组正常饲养, 后两组进行癫痫造模, 造模后7 d, 所有大鼠按照分组分别进行双侧海马内注射Ephrin-B3的激动剂(EphB3-Fc)和Ephrin-B3激动剂的对照剂Fc-control, 1次/d, 连续7 d。给药结束后, 观察两周内大鼠行为与脑电图的变化, 采用免疫组化及Western blot检测Reelin蛋白及p-Dab1蛋白表达变化。采用SPSS 21.0进行统计分析, 多组间比较采用单因素方差分析, 两两比较采用Tukey’’s检验。结果免疫组化和Western blot结果均显示, 模型组大鼠海马组织中Reelin和p-Dab1蛋白在致痫后7 d、14 d、60 d表达均低于对照组(均P<0.01)。免疫组化结果显示, 与癫痫后Fc-control组相比, 癫痫后EphB3-Fc组大鼠海马组织中p-Dab1蛋白的平均光密度值更高[(0.41±0.04), (0.58±0.06), P<0.05]。Western blot结果显示, 癫痫后EphB3-Fc组大鼠海马组织中p-Dab1蛋白表达显著高于癫痫后Fc-control组[(1.34±0.04), (2.26±0.10), P<0.01]。动物行为学监测显示, 与癫痫后Fc-control组相比, 癫痫后EphB3-Fc组大鼠自发性痫性发作持续时间更短[(39.00±1.79)s, (26.50±1.87)s;t=23.21, P<0.01], 频率更低[(2.00±0.89)次, (0.50±0.55)次;t=2.32, P<0.01], 潜伏期延长[(6.33±1.37)d, (12.50±1.87)d;t=2.52, P<0.01]。脑电图结果显示, 与癫痫后Fc-control组相比, 癫痫后EphB3-Fc组的大鼠脑电图痫性放电幅度下降[(37.30±1.21)μV, (29.00±1.41)μV;t=25.14, P<0.01], 发作持续时间缩短[(5.35±0.19)s, (2.35±0.19)s;t=3.13, P<0.01]。结论 Ephrin-B3通过上调Reelin和p-Dab1减轻颞叶癫痫大鼠自发复发性癫痫发作。
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