多色流式细胞术检测CHB患者外周血多重细胞因子分泌的Th细胞亚群

作者：姜钰; 王蓓蓓; 孔雅娴; 李玉鑫; 汪笛; 宋洋子; 王宪波; 曾辉

来源：中国肝脏病杂志(电子版), 2017, 9(04): 43-48.

DOI：10.3969/j.issn.1674-7380.2017.04.007

• 肝炎,乙型,慢性
• 多色流式细胞术
• 细胞因子
• Th细胞亚群

目的建立多色流式胞内细胞因子检测方法,明确慢性乙型肝炎(chronic hepatitis B,CHB)免疫清除期患者外周血Th淋巴细胞亚群细胞因子的分泌特点,探讨CHB患者多重细胞因子的表达模式。方法选取2017年3月至2017年4月就诊于首都医科大学附属北京地坛医院的CHB免疫清除期患者10例及健康对照者10例为研究对象。根据多色流式荧光搭配原则,确立外周血T淋巴细胞CD3、CD4、CD8及细胞因子GM-CSF、TNF-α、IFN-γ的六色流式细胞配色方案。利用健康对照者外周血单个核细胞(peripheral blood mo-nonuclear cell,PBMC)调节最适检测电压及荧光补偿,明确PMAIonomycin的体外刺激方案。分离10例CHB患者外周血PBMC细胞,PMA-Ionomycin体外刺激5小时后,行多重流式细胞因子染色,利用多色流式细胞仪LSR Fortessa获取细胞,Flowjo10.0流式细胞软件分析健康对照者及CHB患者外周血Th细胞亚群胞内细胞因子共表达水平。采用Graph Pad Prism 7.0对所得数据进行统计分析。结果建立了多重细胞因子的胞内染色方案,明确了GM-CSF、TNF-α、IFN-γ在Th细胞上的共表达分析策略,确认存在分泌双重细胞因子GM-CSF+TNF-α+、GM-CSF+IFN-γ+的Th细胞亚群。通过检测CHB患者外周血样本,发现CHB患者分泌GM-CSF、GM-CSF+TNF-α+、GMCSF+IFN-γ+的Th细胞亚群百分率均显著高于健康对照组,差异具有统计学意义(t=2.576、4.208、2.671,P均<0.05)。结论建立的多色流式细胞因子胞内染色方案可用于明确CHB患者外周血分泌双重细胞因子的Th细胞亚群的分布模式;双重细胞因子分泌的Th细胞亚群的检测可能为临床上CHB患者免疫状态的评估提供可靠依据。

• 单位
  首都医科大学附属北京地坛医院