热休克蛋白90抑制剂对间充质干细胞增殖、凋亡及成骨分化的影响

作者：余月明; 周雷; 张铁骑; 王明海^*

来源：中华实验外科杂志, 2018, 35(08): 1497-1499.

DOI：10.3760/cma.j.issn.1001-9030.2018.08.033

• 热休克蛋白90抑制剂
• 凋亡
• 成骨分化
• 间充质干细胞

目的观察热休克蛋白90抑制剂17-丙烯胺基-17-去甲氧基格尔德霉素(17-AAG)对间充质干细胞C3H10T1/2增殖、凋亡及成骨分化的影响。方法用0、0.001、0.010、0.100和1.000μmol/L浓度17-AAG处理C3H10T1/2,细胞计数试剂盒(CCK-8)检测C3H10T1/2增殖;流式细胞术检测0、0.1和1.0μmol/L浓度17-AAG作用下细胞的凋亡率;0、0.1、0.5、1.0μmol/L 17-AAG处理后,Western blot检测凋亡相关蛋白的变化,半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶(Caspase)-3试剂盒检测Caspase-3酶活性的变化;0、0.01μmol/L17-AAG处理后,碱性磷酸酶(ALP)染色和ALP活性测定检测两组成骨分化的强弱。结果 0、0.001、0.010、0.100和1.000μmol/L17-AAG处理细胞后,随着浓度增加,C3H10T1/2的生长增殖明显受到抑制,呈时间浓度依耐性。流式细胞术检测,0、0.1、1.0μmol/L 3组凋亡率分别为(1.36±0.43)%、(5.37±1.10)%、(13.30±1.94)%,0.1、1.0μmol/L组较对照组差异均有统计学意义(P=0.014、0.011),0.1、1.0μmol/L两组之间差异也有统计学意义(P=0.048)。Western blot结果显示随着17-AAG浓度的升高,抗凋亡蛋白B淋巴细胞/白血病-2(bcl-2)减少,促凋亡蛋白bcl-2相关X蛋白(bax)、BH3结构域凋亡诱导蛋白(bid)表达增加。Caspase-3活性测定17-AAG浓度0.1、0.5、1.0μmol/L组与对照组比值分别为1.84±0.11、2.19±0.13、2.79±0.24,与对照组比较差异均有统计学意义(P=0.006,P=0.004,P=0.006)。成骨诱导14 d,0.01μmol/L组ALP染色比未处理组颜色加深,0.01μmol/L组ALP活力与对照组ALP活力比值为1.646±0.139,差异有统计学意义(P=0.015)。结论高浓度17-AAG抑制间充质干细胞C3H10T1/2的增殖,促进其凋亡,低浓度17-AAG能促进C3H10T1/2的成骨分化。

• 单位
  上海市第五人民医院; 复旦大学