非洲猪瘟病毒p54蛋白单克隆抗体制备及其抗原表位鉴定

作者：齐艳丽; 刘桃雪; 于海深; 张超; 鲁维飞; 王江; 褚贝贝^*; 张改平^*

来源：畜牧兽医学报, 2023, 54(01): 281-292.

• 非洲猪瘟病毒
• p54蛋白
• 原核表达
• 单克隆抗体
• 间接ELISA
• 抗原表位

旨在制备非洲猪瘟病毒(ASFV)p54蛋白的特异性单克隆抗体。本研究利用大肠杆菌表达系统表达p54蛋白，免疫BALB/c小鼠，取其脾细胞与SP2/0细胞进行细胞融合。利用纯化的p54蛋白作为包被抗原，采用间接ELISA方法筛选获得阳性杂交瘤细胞。经4次亚克隆后，取杂交瘤细胞上清进行单克隆抗体亚型鉴定，利用体内诱生法制备单克隆抗体并进行纯化。间接ELISA方法检测单克隆抗体的效价，利用交叉反应性试验、间接免疫荧光试验和蛋白印迹对所获单克隆抗体的特异性进行鉴定。根据预测的p54蛋白二级结构，采用逐步截短法分析鉴定单克隆抗体识别的抗原表位区域，并在p54的三级结构中进行标注。结果显示：成功筛选了6株分泌p54单克隆抗体的杂交瘤细胞，分别命名为28G12-1、31G7-1、31G7-2、35F10-1、35F10-2、38D3-1。其中28G12-1、31G7-1、31G7-2重链为IgG2a型，35F10-1、35F10-2、38D3-1重链为IgG1型；轻链均为κ链。单克隆抗体的最低效价为1∶25 600,与猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪伪狂犬病病毒、猪流行性腹泻病毒、猪细小病毒、猪急性腹泻综合征冠状病毒、猪圆环病毒2型不发生交叉反应，特异性强，所获抗体均识别p54蛋白C端127—146 aa肽段。本研究成功获得了ASFV p54蛋白和p54单克隆抗体，并鉴定了6株单克隆抗体的抗原表位，为p54蛋白功能研究和ASFV新型表位疫苗研究奠定了基础。

• 单位
  农业部; 河南农业大学