猪囊等孢球虫和十二指肠贾第虫双重巢式PCR检测方法的建立与应用

作者：李静; 刘珍珍; 陈凯丽; 王朋林; 张龙现; 梁楠^*; 菅复春^*

来源：中国兽医科学, 2022, 52(05): 595-602.

DOI：10.16656/j.issn.1673-4696.2022.0082

• 猪囊等孢球虫
• 十二指肠贾第虫
• SSU rRNA
• gdh
• 双重巢式PCR

为建立同步检测猪囊等孢球虫和十二指肠贾第虫的方法,根据猪囊等孢球虫SSU rRNA和十二指肠贾第虫gdh基因位点建立并优化了一套双重巢式PCR方法,同时对该方法的敏感性、特异性和重复性在临床样品检测中进行验证。结果显示,利用该双重巢式PCR扩增的SSU rRNA和gdh目的产物大小分别为530和432 bp,与单病原巢式PCR的检测结果一致。该方法对猪囊等孢球虫和十二指肠贾第虫的检测下限分别为3.85×10~(-4)和5.51×10~(-3)ng/μL;与毕氏肠微孢子虫、安氏隐孢子虫和大肠杆菌基因组DNA均无交叉反应;利用单巢式PCR和建立的双重巢式PCR方法分别对河南省部分地区的212份猪粪便样品进行特异性扩增,结果显示单巢式PCR与双重巢式PCR检测结果的符合率为100%。本研究首次成功建立了特异性强、灵敏度高的猪囊等孢球虫和十二指肠贾第虫双重巢式PCR检测方法,为猪肠道原虫分子流行病学调查提供了更高效的技术手段。

• 单位
  河南农业大学; 河南农业职业学院