摘要
目的:探索微小核糖核酸-1256(miR-1256)对腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)信号传导和地塞米松(Dex)诱导的成骨细胞损伤的潜在影响。方法:分别培养hFOB1.19成骨细胞和原代人成骨细胞,地塞米松(1μmol/L,48 h)干预两种细胞,使用miR-1256前体的慢病毒(lv-premiR-1256)、miR-1256反义慢病毒(lv-antagomiR-1256)转染两种细胞。实时荧光定量PCR(qPCR)法检测miR-1256和钙结合蛋白39(CAB39)的mRNA表达水平,Western blot法检测miR-1256和CAB39蛋白表达水平,CCK-8法检测细胞活力,台盼蓝染色法检测细胞死亡及细胞凋亡,RNA下拉检测miR-1256和CAB39的结合,Promega试剂盒检测CAB39的3’非翻译区(3’-UTR)荧光素酶报告基因活性,全自动荧光化学发光分析仪进行活性氧检测。统计学分析采用单因素方差分析。结果:miR-1256主要位于细胞质中,直接与CAB39的mRNA结合。在hFOB1.19细胞和原代人成骨细胞中,异位miR-1256过表达后,CAB39 3’-UTR荧光素酶报告基因活性及其表达下调;miR-1256抑制后,CAB39 3’-UTR荧光素酶报告基因活性及其表达升高。miR-1256的过表达降低了AMPKα1-乙酰辅酶A羧化酶(ACC)的磷酸化和AMPK的活性,但抑制miR-1256后上述活性增强。抑制miR-1256可增加NADPH活性和Nrf2级联基因的mRNA表达,从而抑制Dex诱导的hFOB1.19细胞和人成骨细胞的氧化损伤和细胞毒性。结论:miR-1256抑制后的CAB39上调激活了AMPK信号传导,从而保护人成骨细胞免受Dex诱导的氧化损伤。
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