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摘要
目的：探索微小核糖核酸-1256(miR-1256)对腺苷酸活化蛋白激酶（AMPK）信号传导和地塞米松（Dex）诱导的成骨细胞损伤的潜在影响。方法：分别培养hFOB1.19成骨细胞和原代人成骨细胞，地塞米松（1μmol/L,48 h）干预两种细胞，使用miR-1256前体的慢病毒（lv-premiR-1256）、miR-1256反义慢病毒（lv-antagomiR-1256）转染两种细胞。实时荧光定量PCR(qPCR)法检测miR-1256和钙结合蛋白39(CAB39)的mRNA表达水平，Western blot法检测miR-1256和CAB39蛋白表达水平，CCK-8法检测细胞活力，台盼蓝染色法检测细胞死亡及细胞凋亡，RNA下拉检测miR-1256和CAB39的结合，Promega试剂盒检测CAB39的3’非翻译区（3’-UTR）荧光素酶报告基因活性，全自动荧光化学发光分析仪进行活性氧检测。统计学分析采用单因素方差分析。结果：miR-1256主要位于细胞质中，直接与CAB39的mRNA结合。在hFOB1.19细胞和原代人成骨细胞中，异位miR-1256过表达后，CAB39 3’-UTR荧光素酶报告基因活性及其表达下调；miR-1256抑制后，CAB39 3’-UTR荧光素酶报告基因活性及其表达升高。miR-1256的过表达降低了AMPKα1-乙酰辅酶A羧化酶（ACC）的磷酸化和AMPK的活性，但抑制miR-1256后上述活性增强。抑制miR-1256可增加NADPH活性和Nrf2级联基因的mRNA表达，从而抑制Dex诱导的hFOB1.19细胞和人成骨细胞的氧化损伤和细胞毒性。结论：miR-1256抑制后的CAB39上调激活了AMPK信号传导，从而保护人成骨细胞免受Dex诱导的氧化损伤。
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